1993年被選中主演電影《劉海粟》，那是她的第一次觸電經歷，收獲800元片酬。
1996年與保劍峰、陳龍、高曙光、張雅琳共同出演了電視劇《真空愛情記錄》，講述了一群大學畢業生為了工作和愛情奮斗的故事，該劇在當時收獲了一定的收視率。
1998年畢業于上海戲劇學院，畢業后參演了第一部改編自陜西駐滬作家李春平同名小說的電影《玻璃是透明的》，馬伊琍飾演小丫子，出演的第一部古裝電影《孔乙己》至今沒有公映。
2000年出演了《黑洞》飾演演三陪女，馬伊琍的表演事業得到了更好的提升，在電視劇《前世今生》中飾演美貌且氣質超凡的秦婉瑩。
2001年出演電視劇《白天睡覺的女人》飾演李秀，在電影《西施眼》中飾演施雨，該劇在2002年美國夏威夷國際電影節中獲評審團大將及亞洲最佳電影。
2002年因出演電視劇《還珠格格Ⅲ之天上人間》中紫薇一角而被大眾所熟知，雖有一些爭議，但憑此成為了家喻戶曉的女星。2004年出演了由黃磊指導的《天一生水》飾演一個混血姑娘明妮。
2003年在《還珠第三部天上人間》中飾演夏紫薇，成為繼林心如后的第二代紫薇。
2005年出演張黎導演的電視劇《錦衣衛》在劇中就出演了一個這樣的傾國美人客印月，這個女人從某中角度帶動了整個劇情的推動，也是將幾個男性角色之間的關系串聯起來的一個重要點。
2006年，其參演的《喬家大院》在央視熱播，扮演的江雪瑛而收獲了更多的觀眾和粉絲，2006年因拍攝《奮斗》中的夏琳而名聲大噪。她的穿衣風格獨特。
2007年，出演由趙寶剛指導的青春勵志電視劇《奮斗》而名聲驟起，年6月底馬伊琍簽約了內地影視巨擎橙天娛樂。
2008年因拍電視劇《為誰心動》時無悔剃光了頭，憑借影片《江北好人》，馬伊琍戰勝了李冰冰、范冰冰兩位大熱候選人，成為了長春電影節影后。2009年與佟大為共同出演了電視劇《婚姻保衛戰》演出夫妻間事。
2010年與涂松巖領銜主演的都市題材電視劇《雙城生活》真實反映的雙城戀話題，讓許多觀眾產生了不小共鳴并引發了網絡熱議，而馬伊琍在劇中塑造的北京大妞郝京妮，更是受到了網友的普遍好評。
2009年馬伊琍出演了首部反映豫商故事的年代戲《經緯天地》在CCTV-8首播，這也是她繼《喬家大院》之后首次登陸央視，馬伊琍扮演尚達志的妻子順兒，這也是其生產復出首部電視劇作。
2011國劇盛典獲2011年度最佳女演員。2013年年初馬伊琍與杜淳、劉莉莉、陳思斯等眾多明星合作的大戲《青春期撞上更年期2》，此外，還客串電影《不二神探》，并且徹底顛覆以往的形象痛罵文章，成為了影片一大看點。
2012年年末，馬伊琍出席各大衛視跨年晚會。2013年，首當制片人的馬伊琍與首次當導演的丈夫文章合作的電視劇《小爸爸》。
個人生活
登記結婚
2008年，相差8歲的馬伊琍和文章這對姐弟戀結婚，與眾多明星奢華婚禮不同，馬伊琍和文章的結合只是一起領了證。
2012年，10月份爆料稱馬伊琍懷孕，被目擊馬伊琍素顏現身北京某婦產醫院，獨自等候B超檢查，疑似再度懷孕。2013年8月25日晚，某周刊微博爆料稱馬伊俐再懷二胎。
出軌風波
2014年3月28日，有媒體拍到了文章和姚笛在一起的照片。
2014年3月31日凌晨，文章通過新浪微博發布聲明誠懇道歉，稱咎由自取 ，承認與姚笛的婚外情，并表示辜負了家庭，辜負了丈夫和父親的稱呼。同一時間，馬伊琍也發微博回應道戀愛雖易，婚姻不易，且行且珍惜，暗示兩人暫不會離婚。
2014年3月31日晚，最先預告文章出軌新聞的《南都娛樂周刊》執行主編謝曉通過微訪談在線與網友交流了他們追蹤報道文章婚外情的幕后情況。
2014年4月1日下午，馬伊琍的父親以伊琍爸爸為名開通新浪微博，致信《南都娛樂周刊》的領導陳朝華以及謝 曉，他稱此事對家庭打擊甚大，但他認為只要文章可以悔過自新、重新做人，主動回歸家庭就夠了，我女兒可以接受他，日子還得照常過。同時表態文章就是 我們的兒子，兒女犯了錯，父母愿意教他們改，表明馬伊琍和文章不會離婚，文章已獲得他們一家的原諒。
夏威夷度假
2014年7月1日，媒體報道文章和馬伊琍夫妻兩人在夏威夷度假。
再次求婚
2015年6月29日，馬伊琍的生日，文章為自己的愛妻慶生并再次求婚。夫妻倆現場深情相擁。文章在上海包場為馬伊琍舉辦生日派對，瞞著她請來眾多好友給老婆一個巨大驚喜。
文章表示：小文以前不靠譜，今天以后想靠譜了。有你，便是一切。老婆，求求你嫁給我。 人物作品
參演電視劇
參演電影
音樂作品
拍攝雜志
2011-11 第3屆英國萬像國際華語電影節最佳女配角獎 追蹤孔令學 （獲獎）
2011-03 第一屆亞洲電視彩虹獎最佳女喜劇演員獎 婚姻保衛戰 （獲獎）
2009-08 第12屆中國電影表演藝術學會金鳳凰獎學會獎 江北好人 （獲獎）
2009-00 第2屆華鼎獎中國年度影視表現最佳女演員獎 江北好人 （獲獎）
2008-07 第9屆中國長春電影節最佳女主角獎 江北好人 （獲獎）
2008-04 第15屆北京大學生電影節最佳女主角獎 江北好人 （提名）
其他榮譽
2012 優品中國文化行大使 （獲獎）
2012 星尚大典星尚演繹先鋒人物 （獲獎）
2011 2011中國最美50人盛典獲得溫暖之美大獎 （獲獎）
2011 中國影響2010·時尚盛典最美‧年度熒屏情侶(馬伊琍、佟大為) （獲獎）
2010 南方時尚盛典最受公眾關注 中國時尚明星 （獲獎）
2009 中國國際年度綠色風云人物獎 （獲獎）
2008 大愛時尚盛典精品大愛之星獎 （獲獎）
2007 CCTV少兒頻道歡樂盛典最具奮斗精神獎 （獲獎）
2007 第四屆 COSMO BEAUTY AWARDS獲年度最佳造型獎 （獲獎）
2007 《北京青年周刊》BQ紅人榜藝術紅人獎 （獲獎）
2006 騰訊網娛樂中國·2006星光大典最受歡迎四大花旦(與黃奕、李小冉、劉燁) （獲獎）
綜合榮譽
2013 CCTV 2012中國電視劇年度明星盛典特別突破獎女演員獎 （獲獎）
2012 CCTV 2012中國電視劇年度明星盛典特別突破獎女演員獎 （獲獎）
2011 愛奇藝2012年度盛典年度最佳電視劇女演員 （獲獎）
2011 優酷影視指數盛典開年優酷指數最佳女演員獎 （獲獎）
2011 國劇盛典年度最佳女主角 雙城生活 （獲獎）
2011 大劇盛典獲得開年網絡指數最佳女演員獎 （獲獎）
2010 《申江服務導報》-永華電影盛宴年度影視劇紅人女演員 （獲獎）
2010 《北京青年周刊》BQ紅人榜年度人氣女演員獎 （獲獎）
2010 騰訊星光大典獲年度電視女演員 （獲獎）
2009 2008風尚權利榜最受歡迎女演員獎 （獲獎）
人物評價 因為馬伊俐出道比較早，再加上《奮斗》里夏琳的角色深入人心，外人總覺得她是個強悍的大女人。而婚后接著產后的馬伊俐，認為自己越來越居里夫人了（騰訊網評） 這個角色讓馬伊琍充分展示了極寬的戲路（趙寶剛評）
